পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন (পিসিআর) হল জীবন বিজ্ঞান গবেষণাগারের সবচেয়ে সুপরিচিত পদ্ধতিগুলির মধ্যে একটি।
সংগৃহীত নমুনা বা ফলাফলের চমৎকার পরিচালনা এবং বিশ্লেষণের জন্য পিসিআর প্লেটগুলি প্রথম শ্রেণীর প্লাস্টিকের তৈরি।
তাদের পাতলা, অভিন্ন দেয়াল রয়েছে যা সুনির্দিষ্ট তাপ স্থানান্তর প্রদান করে।
রিয়েল-টাইম প্রয়োগের প্রস্তুতিতে, ডিএনএ বা আরএনএর ক্ষুদ্র ভগ্নাংশগুলিকে বিচ্ছিন্ন করে পিসিআর প্লেটে সংরক্ষণ করা হয়।
পিসিআর প্লেটগুলি তাপ সিল করার ক্ষেত্রে খুব দক্ষ এবং তাপের প্রবাহকেও সীমাবদ্ধ করে।
যাইহোক, যেহেতু পিসিআর প্লেটগুলি দক্ষ এবং নির্ভরযোগ্য, তাই নমুনা প্রক্রিয়াকরণের সময় তারা ত্রুটি এবং ভুলের প্রবণ হয়।
তাই ভালো মানের পিসিআর প্লেট পেতে আগ্রহী হলে। একটি নির্ভরযোগ্য পিসিআর প্লেট প্রস্তুতকারকের সাথে যোগাযোগ করা ভাল। এটি দিয়ে, আপনি সর্বোত্তম মূল্য পেতে নিশ্চিত হতে পারেন।
বিকারক বা নমুনার দূষণ এড়াতে এবং ভুল ফলাফল এড়াতে নিচে কিছু সতর্কতা রয়েছে।
পরিবেশকে জীবাণুমুক্ত করুন
অমেধ্য উপস্থিতি কারণে ভুল ইতিবাচক বা নেতিবাচক ফলাফল আপনি ফলাফল সন্দেহ করতে পারেন.
অমেধ্য এবং দূষক বিভিন্ন রূপে আসে, যেমন সম্পর্কহীন ডিএনএ বা রাসায়নিক সংযোজন, যা শেষ পর্যন্ত প্রতিক্রিয়াটির কার্যকারিতা এবং কার্যকারিতা হ্রাস করে।
পিসিআর প্লেটের দূষণের হার কমানোর অনেক উপায় রয়েছে।
জীবাণুমুক্ত ফিল্টার টিপস ব্যবহার করা পিপেটের মাধ্যমে নমুনায় প্রবেশ করা থেকে অমেধ্য রোধ করার আরেকটি কার্যকর উপায়।
পিসিআর ব্যবহারের জন্য বিশেষভাবে পাইপেট এবং র্যাক সহ একটি সম্পূর্ণ পরিষ্কার সরঞ্জাম সরবরাহ করা হয়। এটি পরীক্ষাগারের চারপাশে অমেধ্য বা দূষিত পদার্থের নগণ্য স্থানান্তরের গ্যারান্টি দেবে।
দূষণ মুছে ফেলার জন্য পাইপেট, র্যাক এবং বেঞ্চগুলিতে ব্লিচ, ইথানল ব্যবহার করুন।
কণা দূষণ আরও কমাতে সমস্ত PCR প্রতিক্রিয়াগুলির জন্য সংরক্ষিত স্থান বরাদ্দ করুন।
প্রতিটি ধাপে পরিষ্কার গ্লাভস ব্যবহার করুন এবং ঘন ঘন পরিবর্তন করুন।
পিসিআর প্লেট
টেমপ্লেটের ঘনত্ব এবং বিশুদ্ধতা পরীক্ষা করুন।
পিসিআর ব্যবহার করে নমুনা বিশ্লেষণ করতে ব্যবহৃত বেঞ্চ এবং সরঞ্জামগুলির পরিচ্ছন্নতা বজায় রাখতে হবে। বিশ্লেষণ এবং প্রক্রিয়াকরণের আগে নমুনার বিশুদ্ধতা যাচাই করা গুরুত্বপূর্ণ।
সাধারণত, বিশ্লেষক ডিএনএ নমুনার ঘনত্ব এবং বিশুদ্ধতার মাত্রা বিবেচনা করে।
260nm/280nm এর শোষণ অনুপাত 1.8 এর কম হওয়া উচিত নয়। অমেধ্যগুলি তখন 230nm এবং 320nm এর মধ্যে তরঙ্গদৈর্ঘ্য ব্যবহার করে চিহ্নিত করা হয়েছিল।
একটি উদাহরণে, ক্যাওট্রপিক লবণ এবং অন্যান্য জৈব যৌগ 230 এনএম শোষণে সনাক্ত করা হয়েছিল। একই সাথে 320nm এ শোষণে ডিএনএ নমুনায় টার্বিডিটি সনাক্ত এবং যাচাই করুন।
পিসিআর প্লেট এবং পণ্য ওভারলোড করা এড়িয়ে চলুন
যদিও এটি একই সময়ে একাধিক পণ্য চালানো বাঞ্ছনীয়, এটি পিসিআর প্লেটগুলির ক্রস-দূষণের কারণ হতে পারে।
বিভিন্ন পণ্যের সাথে পিসিআর প্লেট ওভারলোড করা অপচয়জনক এবং নমুনা সনাক্ত করা কঠিন করে তোলে।
পিসিআর রিএজেন্টের অ্যালিকোট রেকর্ড রাখুন
ক্রমাগত হিমায়িত/গলে যাওয়া চক্র এবং অ্যালিকোটগুলির ঘন ঘন ব্যবহার পিসিআর রিএজেন্ট, এনজাইম এবং ডিএনটিপিগুলিকে পুনরায় ক্রিস্টালাইজেশনের মাধ্যমে ক্ষতিগ্রস্ত করতে পারে।
সর্বদা বিশ্লেষণের জন্য নমুনা প্রস্তুত করার সময় ব্যবহৃত অ্যালিকোটগুলির হার নিরীক্ষণ করার চেষ্টা করুন।
পছন্দের LIMS স্টক এবং পরিমাণ রিএজেন্ট এবং নমুনা হিমায়িত বা গলানো নিয়ন্ত্রণের জন্য আরও উপযুক্ত।
সর্বোত্তম annealing তাপমাত্রা চয়ন করুন.
ভুল অ্যানিলিং তাপমাত্রা বাছাই করা এবং ব্যবহার করা পিসিআর ফলাফলে ত্রুটি ধারণ করার আরেকটি উপায়।
কখনও কখনও প্রতিক্রিয়া পরিকল্পনা হিসাবে যেতে না. একটি সফল প্রতিক্রিয়া প্রচারের জন্য অ্যানিলিং তাপমাত্রা হ্রাস করা দরকার।
যাইহোক, তাপমাত্রা কমানো মিথ্যা পজিটিভ এবং প্রাইমার-ডাইমারের সম্ভাবনা বাড়িয়ে দেয়।
পিসিআর প্লেট ব্যবহার করার সময়, গলে যাওয়া বক্ররেখার বিশ্লেষণ নিশ্চিত করা গুরুত্বপূর্ণ কারণ এটি সঠিক অ্যানিলিং তাপমাত্রা নির্বাচন করার জন্য একটি ভাল সূচক।
প্রাইমার ডিজাইন সফ্টওয়্যার ডিজাইনে সহায়তা করে, সঠিক অ্যানিলিং তাপমাত্রা প্রদান করে, সরাসরি পিসিআর প্লেটের ত্রুটিগুলি হ্রাস করে।
পিসিআর প্লেট