কোষ সংস্কৃতি হল কোষ এবং আণবিক জীববিজ্ঞানে ব্যবহৃত সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ সরঞ্জামগুলির মধ্যে একটি, যা স্বাভাবিক শারীরবিদ্যা এবং জৈব রসায়ন (যেমন, বিপাকীয় অধ্যয়ন, বার্ধক্য) অধ্যয়নের জন্য একটি চমৎকার মডেল সিস্টেম প্রদান করে, কোষের উপর ওষুধ এবং বিষাক্ত যৌগের প্রভাবের পাশাপাশি প্রভাবগুলি কোষের মিউটাজেনেসিস এবং কার্সিনোজেনেসিস। এটি ওষুধের স্ক্রীনিং এবং বিকাশে এবং জৈবিক যৌগগুলির (যেমন ভ্যাকসিন, থেরাপিউটিক প্রোটিন) বৃহৎ আকারের উৎপাদনেও ব্যবহৃত হয়। এই অ্যাপ্লিকেশনগুলির যেকোনো একটির জন্য কোষ সংস্কৃতি ব্যবহার করার একটি প্রধান সুবিধা হল ফলাফলের ধারাবাহিকতা এবং পুনরুত্পাদনযোগ্যতা যা ক্লোনাল কোষগুলির একটি ব্যাচ ব্যবহার করে প্রাপ্ত করা যেতে পারে।
সেল সংস্কৃতি
কোষ সংস্কৃতি বলতে প্রাণী বা উদ্ভিদ থেকে কোষ অপসারণ এবং একটি অনুকূল কৃত্রিম পরিবেশে তাদের বৃদ্ধি বোঝায়। কোষগুলিকে সরাসরি টিস্যু থেকে সরানো যেতে পারে এবং সংস্কৃতির আগে এনজাইম্যাটিক বা যান্ত্রিকভাবে বিচ্ছিন্ন করা যেতে পারে, অথবা সেগুলি প্রতিষ্ঠিত কোষ লাইন বা স্ট্রেন থেকে উদ্ভূত হতে পারে।
1. প্রাথমিক প্রশিক্ষণ
প্রাথমিক সংস্কৃতি বলতে কোষগুলিকে টিস্যু থেকে বিচ্ছিন্ন করার পর সংস্কৃতির পর্যায়কে বোঝায় এবং উপযুক্ত পরিস্থিতিতে বংশবিস্তার করা হয় যতক্ষণ না তারা সমস্ত উপলব্ধ স্তর দখল করে (অর্থাৎ, সঙ্গমে পৌঁছায়)। এই পর্যায়ে, কোষগুলিকে অবশ্যই একটি নতুন পাত্রে স্থানান্তর করে উপসংস্কৃতি (অর্থাৎ, উত্তরণ) করতে হবে যাতে ক্রমাগত বৃদ্ধির জন্য আরও জায়গা পাওয়া যায়।
2. সেল লাইন
প্রথম উপসংস্কৃতির পরে, প্রাথমিক সংস্কৃতিকে সেল লাইন বা সাবক্লোন বলা হয়। প্রাথমিক সংস্কৃতি থেকে প্রাপ্ত কোষ রেখাগুলির একটি সীমিত জীবনকাল থাকে (অর্থাৎ, তারা সসীম) এবং যখন সেগুলি অতিক্রম করা হয়, তখন সর্বাধিক বৃদ্ধির সম্ভাবনা সহ কোষগুলি প্রাধান্য পায়, যার ফলে জনসংখ্যার লিঙ্গে জিনোটাইপিক এবং ফেনোটাইপিক অভিন্নতা একটি ডিগ্রী হয়।
3. সেল লাইন
একটি কোষ লাইন একটি কোষের স্ট্রেনে পরিণত হয় যদি কোষ লাইনের একটি উপ-জনসংখ্যা ক্লোনিং বা অন্যান্য পদ্ধতির মাধ্যমে সংস্কৃতি থেকে সক্রিয়ভাবে নির্বাচিত হয়। প্যারেন্টাল লাইন শুরু হওয়ার পরে সেল লাইনগুলি প্রায়শই অতিরিক্ত জেনেটিক পরিবর্তনগুলি অর্জন করে।
4. সীমিত সেল লাইন এবং ক্রমাগত সেল লাইন
সাধারন কোষগুলি সাধারণত তাদের বংশবৃদ্ধির ক্ষমতা হারানোর আগে সীমিত সংখ্যক বার বিভক্ত হয়, এটি একটি জেনেটিক্যালি নির্ধারিত ঘটনা যাকে সেন্সেসেন্স বলা হয়; এই কোষ রেখাগুলোকে সসীম বলা হয়। যাইহোক, কিছু কোষ লাইন রূপান্তর নামক একটি প্রক্রিয়ার মাধ্যমে অমর হয়ে যায়, যা স্বতঃস্ফূর্তভাবে ঘটতে পারে বা রাসায়নিকভাবে বা ভাইরালভাবে প্ররোচিত হতে পারে। একটি সসীম কোষ রেখা একটি ক্রমাগত কোষ রেখায় পরিণত হয় যখন এটি একটি রূপান্তরের মধ্য দিয়ে যায় এবং অনির্দিষ্টকালের জন্য বিভক্ত করার ক্ষমতা অর্জন করে।
ক্রমাগতভাবে সংষ্কৃত কোষ রেখাগুলি জেনেটিক প্রবাহের প্রবণ, সসীম কোষ লাইনগুলি বয়সের জন্য ধ্বংসপ্রাপ্ত, সমস্ত কোষের সংস্কৃতি জীবাণু দূষণের জন্য সংবেদনশীল, এবং এমনকি সেরা-চালিত পরীক্ষাগারগুলিতেও সরঞ্জামের ব্যর্থতা ঘটতে পারে। যেহেতু প্রতিষ্ঠিত সেল লাইনগুলি একটি মূল্যবান সংস্থান যার প্রতিস্থাপন ব্যয়বহুল এবং সময়সাপেক্ষ, তাই দীর্ঘমেয়াদী স্টোরেজের জন্য তাদের ক্রায়োপ্রেসার করা অপরিহার্য।
উপ-সংস্কৃতি থেকে অল্প সংখ্যক অবশিষ্ট কোষ পাওয়া গেলে, সেগুলিকে বীজ স্টক হিসাবে হিমায়িত করা উচিত এবং সাধারণ পরীক্ষাগার ব্যবহার থেকে রক্ষা করা উচিত। হিমায়িত বীজ স্টক থেকে কার্যকরী স্টক প্রস্তুত এবং পুনরায় পূরণ করা যেতে পারে। যদি বীজের স্টক শেষ হয়ে যায়, তাহলে ক্রায়োপ্রিজারড ওয়ার্কিং স্টকটি তাজা বীজ স্টক প্রস্তুত করার জন্য একটি উৎস হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে, যা প্রাথমিক হিমায়িত থেকে পরিমাণে ন্যূনতম বৃদ্ধি পায়।
সংষ্কৃত কোষগুলিকে ক্রায়োপ্রিজারভ করার সর্বোত্তম উপায় হল তরল নাইট্রোজেনে, সম্পূর্ণ মাঝারি আকারে, ডাইমিথাইল সালফক্সাইড (DMSO) বা গ্লিসারলের মতো ক্রাইওপ্রোটেক্টেন্টের উপস্থিতিতে। Cryoprotectants মাধ্যমটির হিমাঙ্ক কমিয়ে দেয় এবং শীতল হওয়ার হারও কমিয়ে দেয়, বরফের স্ফটিক গঠনের ঝুঁকিকে ব্যাপকভাবে হ্রাস করে, যা কোষের ক্ষতি করতে পারে এবং কোষের মৃত্যুর দিকে নিয়ে যেতে পারে।
DMSO টিস্যুতে জৈব অণু প্রবেশের সুবিধার্থে পরিচিত। ডাইমিথাইল সালফক্সাইডযুক্ত রিএজেন্টগুলি পরিচালনা করার সময়, এই উপাদানের বিপদগুলির জন্য উপযুক্ত সরঞ্জাম এবং অনুশীলনগুলি ব্যবহার করা উচিত। স্থানীয় প্রবিধান অনুযায়ী রিএজেন্ট নিষ্পত্তি করুন।
হিমায়িত কাজ সেল স্টক থেকে কোষ বৃদ্ধি
মোবাইল ব্যাঙ্কিং লগবুক পূরণ করতে ভুলবেন না
প্যাসেজের সংখ্যা নির্ধারণ করুন, যেমন যদি পূর্ববর্তী কোষগুলি হিমায়িত হয়ে থাকে এবং সেগুলি তিনবার গলানো হয়, তাহলে গলানো প্রক্রিয়াটি হবে চতুর্থ উত্তরণ।
সেল লাইন, প্যাসেজ নম্বর এবং তারিখ সহ লেবেলযুক্ত T75 ফ্লাস্কগুলিতে গ্রোথ মিডিয়া (ন্যূনতম মিডিয়া, বাছুরের সিরাম এবং অ্যান্টিবায়োটিক) যোগ করুন
একটি CO ইনকিউবেটরে ফ্লাস্কটি অনুভূমিকভাবে 37 ডিগ্রি এবং 5 শতাংশ CO তে কমপক্ষে 15 মিনিটের জন্য রাখুন। এটি মাধ্যমটিকে উষ্ণ করবে এবং এটিকে তার স্বাভাবিক pH-এ নিয়ে আসবে (7৷{4}}.6)
হিমায়িত শিশিগুলিকে সেল লাইন সহ 37 ডিগ্রি জলের স্নানে মৃদু আন্দোলনের সাথে গলা দিন। দূষণের ঝুঁকি কমাতে, ও-রিং এবং ক্যাপ পানির স্তরের উপরে রাখুন (2-5 মিনিট)।
একটি জৈবিক নিরাপত্তা ক্যাবিনেটে (BSL-2) শিশি রাখুন। দূষণ এড়াতে, শিশি খোলার আগে 70 শতাংশ ইথানল দিয়ে মুছুন।
হিমায়িত সেল ফ্লাস্কের বিষয়বস্তুগুলিকে একটি T75 ফ্লাস্কে স্থানান্তর করুন যাতে বৃদ্ধির মাধ্যম থাকে। ফ্লাস্কের পৃষ্ঠের উপর কোষগুলিকে সমানভাবে বিতরণ করতে ফ্লাস্কটিকে আলতোভাবে মিশ্রিত করুন এবং ঝাঁকান।
5 শতাংশ CO2 সহ 37 ডিগ্রিতে একটি CO2 ইনকিউবেটরে রাতারাতি ফ্লাস্কটি সেঁকুন। সেল রাতারাতি সংযুক্ত করার অনুমতি দিন
বৃদ্ধির মাধ্যম পরিবর্তন
37 ডিগ্রী, 5 শতাংশ CO2 এ অতিরিক্ত 2-4 দিন ফ্লাস্কটি সেঁকুন এবং কোষ বৃদ্ধি না হওয়া পর্যন্ত পর্যবেক্ষণ করুন
একবার কোষগুলি প্রায় 90 শতাংশ সঙ্গমে পৌঁছে গেলে, কোষের স্টকটি T150 ফ্লাস্ক ব্যবহার করে প্রসারিত করা যেতে পারে