কিভাবে পরীক্ষামূলক ভোগ্যপণ্য চয়ন করবেন: পিসিআর ভোগ্য সামগ্রীর 8টি ভিন্ন দিক আপনার জানা দরকার

আজ, আসুন পিসিআর পরীক্ষা-নিরীক্ষার একটি মূল উপাদান সম্পর্কে কথা বলি - ভোগ্য সামগ্রী। পিসিআর-এ ঘন ঘন ভিজিটর হিসাবে, পিসিআর ভোগ্যপণ্যের সাথে সম্পর্কিত বৈশিষ্ট্য এবং পরিভাষা বোঝা প্রয়োজন।

ব্র্যান্ড, স্পেসিফিকেশন, রঙ ইত্যাদি সহ বাজারে বিভিন্ন ধরণের পিসিআর ব্যবহার্য সামগ্রী রয়েছে, যা চমকপ্রদ। আসুন এটি ধাপে ধাপে বুঝতে পারি।

পিসিআর প্লেট

1. উপকরণ

সাধারণত, পিসিআর ভোগ্যপণ্যের কাঁচামাল হল পলিপ্রোপিলিন। এটি একটি ভাল তাপ-প্রতিরোধী জড় উপাদান। কাজের তাপমাত্রা পরিসীমা হল -30 থেকে 140 ডিগ্রি, যা এটিকে PCR বিক্রিয়ার তাপচক্রের সময় তাপীয় শক্তির পরিবর্তনগুলিকে সহ্য করতে সক্ষম করে এবং PCR বিক্রিয়া পদ্ধতিতে পদার্থগুলিকে সীলমোহর এবং সুরক্ষায় একটি ভাল ভূমিকা পালন করে৷

পলিপ্রোপিলিন সম্পর্কে আরও জানুন

2. রঙ

সাধারণ হল সাদা টিউব এবং স্বচ্ছ পিসিআর টিউব। ঐতিহ্যগত পিসিআর পরীক্ষায়, উভয়ের মধ্যে কোন পার্থক্য নেই। যাইহোক, একই রিয়েল-টাইম/কিউপিসিআর পরীক্ষায়, সাদা টিউবগুলি অপেক্ষাকৃত বেশি সংবেদনশীল এবং অ্যাপিক্যাল সিগন্যাল রিড সহ কিউপিসিআর যন্ত্রগুলির জন্য সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল (নীচের চিত্র A এবং B দেখুন)। এটা এমন কেন?

পিসিআর টিউব

উত্তর: পরিষ্কার টিউবের তুলনায় সাদা টিউবের জন্য কম Ct মান; বি: সাদা টিউবগুলির সাথে আরও ভাল পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা।

qPCR-এর মূল ডেটা হল Ct মান, এবং ফ্লুরোসেন্স সিগন্যাল হল Ct মান গণনা করার জন্য ডেটা উৎস, তাই টিউবের ফ্লুরোসেন্স সম্পূর্ণরূপে ডিটেক্টরে প্রেরণ করা যায় কিনা তা খুবই গুরুত্বপূর্ণ। সাদা টিউব প্রাচীর ফ্লুরোসেন্সকে টিউবের প্রাচীরের মধ্য দিয়ে যেতে এবং প্রতিসরণ করতে বাধা দেয় (নীচের চিত্র A), যার ফলে ফ্লুরোসেন্সকে হিটিং ব্লকে (অর্থাৎ, ধাতুর ছিদ্রের প্রাচীর যেখানে নলটি স্থাপন করা হয়েছে) প্রেরণ করা থেকে বাধা দেয় এবং শোষিত হতে পারে। অথবা ব্লক দ্বারা অসঙ্গতভাবে প্রতিফলিত হয়। পরিষ্কার টিউবের তুলনায় সাদা টিউবের ডগায় একটি শক্তিশালী এবং আরও ঘনীভূত ফ্লুরোসেন্ট সংকেত সংগ্রহ করা হয়েছিল (নীচের চিত্র B)।

পিসিআর টিউব

উত্তর: স্বচ্ছ টিউব এবং সাদা টিউবে প্রতিপ্রভ সংকেতের পরিবর্তনশীল প্রবণতা; বি: একই পরিমাণ ফ্লুরোসেসিন যোগ করার পর ফ্লুরোসেন্স তীব্রতার তুলনা।

তাই আপনি যদি টপ-রিডিং qPCR ইন্সট্রুমেন্ট ব্যবহার করেন, তাহলে সাদা টিউব ব্যবহার করে দেখুন।

3. গুণমান (চোঁড়া বা ঝুঁকে নয়)

ভোগ্য মানের গুরুত্ব এখানে জোর দেওয়া হয়েছে। qPCR ভোগ্যপণ্য অবশ্যই দূষিত এবং প্রতিরোধক মুক্ত হতে হবে। উচ্চ চাপ এবং বিকিরণ ব্যাকটেরিয়া এবং ডিএনএকে সরিয়ে দেয়, তবে ধুলো এবং ডিএনএ অবশিষ্টাংশ নয়, যা পিসিআর প্রতিক্রিয়াকে বাধা দিতে পারে বা অনির্দিষ্ট পরিবর্ধন তৈরি করতে পারে। পদার্থের শোষণ ক্ষমতা রয়েছে এবং এমনকি ক্ষুদ্র দূষণকারীও প্রতিক্রিয়া পদ্ধতিতে ফ্লুরোসেন্স শোষণ করবে এবং ফ্লুরোসেন্স সংকেত সংগ্রহকে প্রভাবিত করবে। পরীক্ষার একটি অতিরঞ্জিত সংস্করণ পরীক্ষায় অপবিত্রতা দূষণের প্রভাব প্রদর্শনের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। নীচের চিত্রে দেখানো হয়েছে, অষ্টকের প্রতিক্রিয়া কূপের একটিতে একটি অপবিত্রতা স্থাপন করা হয়েছিল। প্রত্যাশিত হিসাবে, পরিবর্ধন বক্ররেখাগুলি চিহ্নিত অসঙ্গতিগুলি দেখিয়েছে।

PCR প্রতিক্রিয়া টিউব মধ্যে অমেধ্য

↑ প্রতিক্রিয়া টিউবে অমেধ্য

8 স্ট্রিপ

↑ 8 টি টিউবের জন্য বারবার প্রতিক্রিয়ার ফলাফল, বাম কূপের অশুদ্ধতা বক্ররেখাকে "বিচ্যুত করে"।

অনুস্মারক: সতর্কতা অবলম্বন করুন যাতে দীর্ঘ সময়ের জন্য ব্যবহারযোগ্য জিনিসগুলি বাতাসে না থাকে। ভোগ্যপণ্য বের করার পরে, খালি হাতে এটি স্পর্শ এড়াতে প্যাকেজিং ব্যাগটি দ্রুত সিল করতে ভুলবেন না। যদি সম্ভব হয়, একটি পরিষ্কার বেঞ্চে কাজ করুন।

4. ক্ষমতা / আকার / ফ্লাক্স

ভলিউম নির্ধারণ করে কতটা নমুনা (প্রতিক্রিয়া ভলিউম) লোড করা যেতে পারে। অতিরিক্ত মাত্রার ফলে তাপ স্থানান্তরের কার্যকারিতা, স্পিলেজ বা ক্রস-দূষণ কমে যেতে পারে; underdosing বাষ্পীভবন নমুনা ক্ষতি হতে পারে. qPCR যন্ত্রের হিটিং ব্লক প্রযোজ্য ভোগ্য সামগ্রী এবং প্রযোজ্য প্রতিক্রিয়া সিস্টেমের আকারও নির্ধারণ করবে। থ্রুপুট বোঝা সহজ, এটি একটি একক পরীক্ষায় সর্বাধিক সংখ্যক নমুনা লোড করা যেতে পারে। সাধারণ ক্ষমতা এবং ফ্লাক্স স্পেসিফিকেশন নীচের টেবিলে দেখানো হয়েছে:

একক টিউব/আটটি সারি {{0}}.2mL, 0.1mL

{{0}}ওয়েল প্লেট 0.2mL, 0.1mL

{{0}}ওয়েল প্লেট 0.2 মিলি

ক্ষমতা স্পেসিফিকেশন এছাড়াও সাধারণত স্ট্যান্ডার্ড এবং নিম্ন ধরনের বিভক্ত করা হয়, নীচে দেখানো হিসাবে. নিম্ন প্রফাইল ভোগ্য একটি কম উচ্চতা আছে. এই সংক্ষিপ্ত নকশাটি প্রতিক্রিয়া সিস্টেমের ("মৃত ভলিউম" - অকেজো অংশ) উপরের স্থানকে কমিয়ে দেয়, তাপীয় সাইকেল চালানোর সময় বাষ্পীভবনের প্রভাবকে হ্রাস করে এবং তাপ স্থানান্তর দক্ষতা উন্নত করতে হিটিং মডিউলটিকে এটির চারপাশে আরও বেশি পরিমাণে মোড়ানো সক্ষম করে। অতএব, লো প্রোফাইল টিউবগুলি "দ্রুত" টিউব বা প্লেট হিসাবেও পরিচিত।

পিসিআর টিউব

অনুস্মারক: সাধারণত ব্যবহৃত প্রতিক্রিয়া ভলিউম হল 20 μL, এবং এটি 0.1 mL বা একটি ছোট আয়তনের একটি ছোট আয়তনের প্রতিক্রিয়া টিউব ব্যবহার করার পরামর্শ দেওয়া হয়।

5. প্রাচীর বেধ

টিউবের প্রাচীরের বেধ সরাসরি তাপ পরিবাহিতাকে প্রভাবিত করে। সামঞ্জস্যপূর্ণ তাপ স্থানান্তর প্রদানের জন্য পিসিআর ব্যবহার্য সামগ্রীগুলির প্রাচীরের সমান বেধ হওয়া উচিত। অতি-পাতলা টিউব প্রাচীর স্ট্যান্ডার্ড সংস্করণের তুলনায় 50 শতাংশ পাতলা, যা তাপীয় বাধাকে আরও কমিয়ে দেয় এবং দ্রুত এবং ভাল প্রতিক্রিয়ার প্রভাব নিয়ে আসে। অতএব, পিসিআর প্রতিক্রিয়াগুলির কার্যকারিতা সর্বাধিক করার জন্য এবং স্থিতিশীল এবং দক্ষ প্রতিক্রিয়া নিশ্চিত করার জন্য, অভিন্ন এবং অতি-পাতলা পিসিআর ব্যবহারযোগ্য পণ্যগুলি সর্বোত্তম পছন্দ।

6. স্বচ্ছতা

qPCR-এর জন্য ক্যাপস এবং সিলিং ফিল্মগুলির জন্য উচ্চ অপটিক্যাল স্পষ্টতা প্রয়োজন যাতে বিকৃতি হ্রাস করার সময় ফ্লুরোসেন্ট সংকেতগুলির সর্বোত্তম অনুপ্রবেশ এবং সংক্রমণ নিশ্চিত করা যায় (টপ-রিড qPCR যন্ত্রগুলির জন্য)। টিউবের প্রাচীরের স্বচ্ছতা যত বেশি, এটি পরীক্ষামূলক ফলাফলকে প্রভাবিত করতে পারে। কারণ উপরে ব্যাখ্যা করা হয়েছে. ঐতিহ্যগত PCR এই বৈশিষ্ট্য উপেক্ষা করতে পারেন.

7. স্কার্ট

একটি পিসিআর প্লেটের স্কার্ট প্লেটের পেরিফেরাল এক্সটেনশনকে বোঝায়। প্রতিক্রিয়া সিস্টেম তৈরি করার সময়, স্কার্টটি পাইপেটিং প্রক্রিয়াগুলির জন্য একটি স্থিতিশীল সমর্থন হিসাবে কাজ করে এবং স্বয়ংক্রিয় ওয়ার্কস্টেশনগুলির সাথে মিলিত হলে যান্ত্রিক শক্তি এবং গ্রিপ প্রদান করে। তিনটি সাধারণ ধরনের স্কার্ট, হাফ স্কার্ট এবং ফুল স্কার্ট (নীচের চিত্রে A, B, এবং C এর সাথে মিল রয়েছে)।

স্কার্টলেস: বেশিরভাগ PCR বা qPCR যন্ত্রের সাথে ব্যবহার করা যেতে পারে, কিন্তু স্বয়ংক্রিয় অ্যাপ্লিকেশনের জন্য নয়। Pipetting সময় সরানো সহজ, খুব স্থিতিশীল নয়, একটি প্লেট ধারক ব্যবহার করা প্রয়োজন।

হাফ স্কার্ট: ভাল পাইপটিং স্থায়িত্ব সহ স্বয়ংক্রিয় অ্যাপ্লিকেশনের জন্য আদর্শ।

সম্পূর্ণ স্কার্ট প্লেট: স্বয়ংক্রিয় অ্যাপ্লিকেশনের জন্য আদর্শ। ভাল যান্ত্রিক শক্তি, প্রসারিত মডিউল সহ পিসিআর যন্ত্রগুলির জন্য উপযুক্ত, পাইপিংয়ের সময় উচ্চ স্থায়িত্ব।

পিসিআর প্লেট

টিপস: শিল্পায়ন এবং স্বয়ংক্রিয় ব্যাচ প্রক্রিয়াকরণ সহজতর করার জন্য স্কার্টের তাৎপর্য আরও বেশি, রোবোটিক হাতের সাথে মিলিত। ঐতিহ্যগত গবেষণা ল্যাবগুলিতে এটির প্রয়োজন নাও হতে পারে, কোনও স্কার্ট যথেষ্ট নয়।

পিসিআর প্লেট

8. প্যারাফিল্ম

পিসিআর প্লেট সিলিং ফিল্মটি পরিষ্কার প্লাস্টিক বা অ্যালুমিনিয়াম ফয়েল দিয়ে তৈরি। আঠালো স্বচ্ছ ফিল্মগুলি আরও সাধারণ, 96 বা 384 ভাল প্লেটের জন্য উপযুক্ত, এবং যথেষ্ট ভাল আলো প্রেরণ করা উচিত। ফিল্মটি সিল করার সময়, বায়ু ফুটো এড়াতে সিলিং গর্তের চারপাশে ফিল্মটি চাপতে একটি ছোট কার্ড ব্যবহার করা হবে।

আঠালো অ্যালুমিনিয়াম ফিল্ম কম সাধারণ হতে পারে। যদিও qPCR-এর জন্য উপযুক্ত নয়, এটি হালকা-সংবেদনশীল নমুনার জন্য আদর্শ ব্যবহারযোগ্য। কারণ এটিকে পাঞ্চ করা যায়, এটি পিসিআর (প্রচলিত পিসিআরের জন্য) নমুনা স্থানান্তরকে সহজ করে।

পিসিআর প্লেট সিলিং ফিল্ম

সারসংক্ষেপ

পিসিআর সিস্টেমের বাহক হিসাবে, পরীক্ষামূলক ডেটার মান উন্নত করার জন্য ভোগ্যপণ্য অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। আমি আশা করি এই শেয়ারিং আপনাকে পিসিআর ভোগ্যপণ্যের কিছু টিপস বুঝতে সাহায্য করবে এবং ভোগ্যপণ্যের আরও ভালো নির্বাচনের জন্য সাহায্য করবে।