ল্যাবরেটরিতে সাসপেনশন সেল কিভাবে বৃদ্ধি করা যায়?

আমরা সবাই জানি, ল্যাবরেটরিতে সংষ্কৃত কোষের প্রকারগুলিকে মোটামুটিভাবে দুটি ভাগে ভাগ করা যায়: অনুগত কোষ এবং সাসপেনশন কোষ এবং উভয় অবস্থায় মাত্র কয়েক ধরনের কোষ বিদ্যমান।

সাসপেনশন সেল বলতে এমন এক ধরনের কোষকে বোঝায় যেগুলো লিম্ফোসাইট এবং বেশিরভাগ রক্তের সিস্টেম থেকে প্রাপ্ত কোষের মতো সমর্থনের উপর নির্ভর না করে একটি স্থগিত অবস্থায় একটি মাধ্যমে বৃদ্ধি পেতে পারে। (যেমন মাউস লিউকেমিয়া কোষ WEHI-3, মানুষের লিউকেমিয়া কোষ K-562, HL-60)। শিল্পে, আরও বেশি অনুগত কোষগুলি সম্পূর্ণ সাসপেনশনে গৃহপালিত এবং সংস্কৃতি করা হয়েছে। বর্তমানে, SP2/0, NS0, CHO, BHK এবং HEK293 কোষগুলি প্রধানত শিল্পে ব্যবহৃত হয়, এবং এগুলি প্রধানত রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিন উত্পাদনের জন্য ব্যবহৃত হয়; সাধারণত পশুচিকিত্সা জৈবিক পণ্যগুলিতে ব্যবহৃত প্যাসেজ কোষগুলির মধ্যে প্রধানত সম্পূর্ণ সাসপেনশনে সংষ্কৃত BHK21 কোষ অন্তর্ভুক্ত, MDCK কোষ; এবং Vero কোষ, PK কোষ, ST কোষ, Marc145 কোষ ইত্যাদি মাইক্রোক্যারিয়ার সাসপেনশন কালচারের সাহায্যে প্রতিটি কোষের আলাদা বৈশিষ্ট্য রয়েছে।

সাসপেনশন সেল

সাসপেনশন সেল "thp-1" 200x

সাধারণভাবে, সাসপেনশন কোষগুলি অনুগত কোষগুলির তুলনায় পরিচালনা করা সহজ কারণ সাসপেনশন কোষগুলির উত্তরণের জন্য কোনও ট্রিপসিনাইজেশন প্রয়োজন হয় না। তবে এর অর্থ এই নয় যে সাসপেনশন কোষগুলি অনুগত কোষগুলির চেয়ে বৃদ্ধি করা সহজ। নতুনদের জন্য, এটি আরও চ্যালেঞ্জিং। সর্বদা বিভিন্ন সমস্যা রয়েছে: উদাহরণস্বরূপ, কেন মৃত কোষ এবং কোষের পার্থক্য সর্বদা প্রদর্শিত হয়; এটা সম্মত যে উত্তরণ সহজ, কিন্তু ফলাফল পার্থক্য হবে; cryopreservation এবং পুনরুদ্ধারের পরে আবার সমস্যা দেখা দেয়!

এর পরে, আসুন সাসপেনশন কোষের সংস্কৃতি সম্পর্কে কিছু মূল বিষয় নিয়ে আলোচনা করি~

পয়েন্ট 1: যথেষ্ট ধৈর্য, ​​এটি খুব প্রয়োজনীয়

অনেক সাসপেনশন সেল অপেক্ষাকৃত দুর্বল কার্যক্ষমতা থাকে যখন সেগুলি সবেমাত্র ক্রিওপ্রিজারভেশন থেকে পুনরুদ্ধার করা হয়। এই সময়ে, কোষগুলি তাদের স্ব-মেরামত সম্পূর্ণ করতে এবং লগারিদমিক বৃদ্ধির পর্যায়ে প্রবেশ করার জন্য অপেক্ষা করার জন্য আমাদের যথেষ্ট ধৈর্য ধরতে হবে। উদাহরণস্বরূপ, THP-1 (হিউম্যান মনোসাইটিক লিউকেমিয়া) প্রায়ই গলানো থেকে স্বাভাবিক বিস্তার পর্যন্ত পুনরুদ্ধারের সময়কালের 7-10 দিনের প্রয়োজন হয়; জুরকাট, ক্লোন ই6-1 (মানুষের টি লিম্ফোসাইটিক লিউকেমিয়া কোষ) পুনরুদ্ধারের পরেও 5-7 দিন প্রয়োজন। জমে যাওয়ার আগে রাজ্যে ফিরে আসুন। নতুনরা এই সময়ের মধ্যে প্রশিক্ষণ ছেড়ে দিতে পারে, তাই দয়া করে আরও ধৈর্য ধরুন! এই ধরনের কোষের চাষ করাও ধৈর্য চাষের একটি প্রক্রিয়া!

পয়েন্ট 2: ইনোকুলেশন ঘনত্ব উপলব্ধি করুন

সাধারণভাবে বলতে গেলে, সাসপেনশন সেলের ঘনত্ব 500,000/ML এর কম হওয়া উচিত নয়। অনেক সাসপেনশন সেল ঘনত্ব-নির্ভর, এবং কম ঘনত্বের কারণে অপ্রসারণও নবজাতকদের জন্য একটি সাধারণ সমস্যা। অবশ্যই, খুব কম কোষ আছে যাদের ঘনত্ব বেশি হলে অবস্থা খারাপ হয়ে যায়, যেমন W6/32 (মাউস বি সেল হাইব্রিডোমা কোষ)। অতএব, অজানা কোষ চাষ করার আগে কোষের বৈশিষ্ট্যগুলি উপলব্ধি করার জন্য প্রাসঙ্গিক তথ্য অনুসন্ধান করা অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। শুধুমাত্র নিজেকে এবং শত্রু জেনে আপনি সব যুদ্ধ জয় করতে পারেন!

মাঝারি প্রতিস্থাপনের ফ্রিকোয়েন্সি "স্পষ্টভাবে" সীমাবদ্ধ করা উচিত নয়। কোষ হল জীবন্ত জিনিস। একটি অবিচ্ছিন্ন সংস্কৃতি চক্র চলাকালীন, কোষের একটি ভাল বৃদ্ধির অবস্থা বজায় রাখার জন্য কোষের বৃদ্ধির অবস্থার উপর নির্ভর করে পরিপূরক মাধ্যম এবং গ্লুকোজের মতো নির্দিষ্ট পুষ্টিগুলি কয়েকবার যোগ করা যেতে পারে। . সাসপেনশন কালচার প্রক্রিয়া চলাকালীন, কোষের বিস্তারের সাথে, মূল মাধ্যমের পুষ্টির ব্যবহার এবং বিপাক বৃদ্ধির সাথে, কোষের কার্যক্ষমতা হ্রাস পাবে এবং সময়মত পুষ্টির সম্পূরক কোষগুলিকে তুলনামূলকভাবে ভাল জীবন্ত পরিবেশে পরিণত করবে। আমি এখানে বিশদে যাব না, এবং ঘন ঘন সেন্ট্রিফিউগেশন এবং তরল প্রতিস্থাপন এড়াব।

আসুন তরল প্রতিস্থাপন পদ্ধতি সম্পর্কে কথা বলি:

①কেন্দ্রিক পূর্ণ তরল বিনিময় পদ্ধতি‍

অর্থাৎ, সেন্ট্রিফিউগেশন (800-1000rpm, 5min) দ্বারা সমস্ত পুরানো মাধ্যম সরিয়ে ফেলুন এবং তাজা মাধ্যম দিয়ে প্রতিস্থাপন করুন। এই পদ্ধতিটি "ত্বকের কঠিন" ভালভাবে উত্থাপিত সাসপেনশন কোষগুলির (যেমন K562) মাঝারি প্রতিস্থাপনের জন্য উপযুক্ত, বা বর্তমান পরিস্থিতিতে যেখানে কোষগুলি ভাল অবস্থায় রয়েছে এবং ঘনত্ব বেশি, ফলে মাঝারি বেশি খরচ হয়। এই পদ্ধতির সুবিধা হল যে মাধ্যমটি পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে পরিবর্তিত হয় এবং কিছু কোষের ধ্বংসাবশেষ সরানো যায়, তবে এটি কোষগুলির একটি নির্দিষ্ট মাত্রার যান্ত্রিক ক্ষতিও ঘটায়।

②কেন্দ্রিক অর্ধেক বিনিময় পদ্ধতি

অর্থাৎ, সেন্ট্রিফিউজিং (800-1000rpm, 5min) 50 শতাংশ সেল সাসপেনশন, 50 শতাংশ ভলিউম তাজা মাধ্যমে প্রতিস্থাপন করুন। এই পদ্ধতিটি "কপট" কঠিন থেকে সংস্কৃতি কোষের তুলনা করার জন্য উপযুক্ত (যেমন thp-1), অথবা এমন পরিস্থিতি যেখানে ঘনত্ব কম কিন্তু সামঞ্জস্য অবস্থায় আরও ধ্বংসাবশেষ অপসারণ করা প্রয়োজন।

③অবক্ষেপণ তরল বিনিময় পদ্ধতি

অর্থাৎ, একটি সেন্ট্রিফিউজ ব্যবহার করার পরিবর্তে, মাধ্যাকর্ষণ দ্বারা প্রাকৃতিক অবক্ষেপনের পদ্ধতিটি কোষ থেকে মাধ্যমটিকে আলাদা করতে ব্যবহৃত হয়, যাতে তাজা মাধ্যমের সমস্ত বা অংশ প্রতিস্থাপন করা যায়। যাইহোক, এটির প্রয়োগের সীমাবদ্ধতা রয়েছে-এটি শুধুমাত্র সেই কোষগুলির জন্য উপযুক্ত যেগুলি একটি নির্দিষ্ট আকারের কোষ ক্লাস্টার গঠন করতে পারে (অন্যথায় তারা স্বাভাবিকভাবে স্থির হতে পারে না এবং শুধুমাত্র কম গতিতে কেন্দ্রীভূত হতে পারে), বিশেষ করে যখন কোষগুলির সাথে মোকাবিলা করা হয় যেগুলি কোষের একত্রিতকরণের উপর নির্ভর করে। , যেমন NK-92, NK- 92 MI, Jurkat। এই পদ্ধতিটি তরল বিনিময় প্রক্রিয়া চলাকালীন সেন্ট্রিফিউগেশন প্রক্রিয়ার ফলে সৃষ্ট যান্ত্রিক ক্ষতিকে কমিয়ে আনতে পারে, যখন সমষ্টি কোষের ভর ধরে রাখে এবং কোষের ধ্বংসাবশেষ অপসারণ তুলনামূলকভাবে পুঙ্খানুপুঙ্খ।

উপরের পয়েন্টগুলি আয়ত্ত করার পরে, প্লাস একটি ভাল কোষের বীজ, এটি "সুন্দর" সাসপেনশন কোষ বৃদ্ধির কোণার কাছাকাছি!

সেল সংস্কৃতি প্লেট

Yongyue Medical-এর U-আকৃতির সেল কালচার প্লেটটি বেশিরভাগই সাসপেনশন কোষের সংস্কৃতির জন্য ব্যবহৃত হয়, মেডিকেল গ্রেড পলিস্টাইরিন (PS) ব্যবহার করে, একটি 100,000-স্তরের বিশুদ্ধকরণ কর্মশালায় উত্পাদিত, বিকিরণ দ্বারা নির্বীজিত, DNase, RNase এবং পাইরোজেন মুক্ত। -মুক্ত, নিরাপত্তা এবং পরিবেশগত সুরক্ষা।

বিভিন্ন ব্যাকটেরিয়া সংস্কৃতির চাহিদা মেটাতে সেল কালচার প্লেট বিভিন্ন স্পেসিফিকেশনে পাওয়া যায়। পণ্যের ধরনগুলিকে 6-কূপ, 12-ওয়েল, 24-কূপ, 48-ওয়েল, 96-কূপ এবং 384-ওয়েল, এর মধ্যে ভাগ করা হয়েছে যেটি 96-কূপটি সমতল-নিচ, U-নিচ, V-নিচের নীচে বিভক্ত; U-আকৃতির কালচার প্লেটগুলি বেশিরভাগ সাসপেনশন কোষের সংস্কৃতির জন্য ব্যবহৃত হয়; ভি-আকৃতির কালচার প্লেটগুলি বেশিরভাগ ইমিউনোলজিক্যাল হেমাগ্লুটিনেশন পরীক্ষার জন্য ব্যবহৃত হয়।