পিসিআর প্রযুক্তি ডিএনএ-র প্রাকৃতিক প্রতিলিপি প্রক্রিয়ার অনুরূপ, এবং এর নির্দিষ্টতা লক্ষ্য ক্রমের উভয় প্রান্তের পরিপূরক অলিগোনিউক্লিওটাইড প্রাইমারের উপর নির্ভর করে। পিসিআর তিনটি মৌলিক প্রতিক্রিয়া পদক্ষেপ নিয়ে গঠিত: বিকৃতকরণ, অ্যানিলিং এবং এক্সটেনশন। এই প্রতিক্রিয়া প্রক্রিয়া PCR প্রতিক্রিয়া পাত্রে বাহিত হয়। জিন পরিবর্ধন যন্ত্রের ক্রমাগত বিকাশের সাথে, প্রতিক্রিয়া ধারকটি সেন্ট্রিফিউজ টিউবের 1.5ml থেকে 0.2ml (0.25ml) থেকে পাতলা দেয়াল {{ পর্যন্ত ধীরে ধীরে বিকাশ অনুভব করেছে৷ 7}}.2ml PCR এর জন্য নিবেদিত। , 0.1mlpcr টিউব। পিসিআর অ্যামপ্লিফিকেশন প্রতিক্রিয়ার সংখ্যা বৃদ্ধির সাথে, পিসিআর স্ট্রিপ এবং পিসিআর প্লেটের জন্য উচ্চ-থ্রুপুট জিন পরিবর্ধনের পাত্রগুলি ধীরে ধীরে গঠিত হয়।
পিসিআর তিনটি মৌলিক প্রতিক্রিয়া পদক্ষেপ নিয়ে গঠিত: ডিনাচুরেশন-অ্যানিলিং-এক্সটেনশন
টেমপ্লেট ডিএনএ এর বিকৃতকরণ:
একটি নির্দিষ্ট সময়ের জন্য টেমপ্লেট ডিএনএ প্রায় 94 ডিগ্রিতে উত্তপ্ত হওয়ার পরে, টেমপ্লেট ডিএনএর ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ বা পিসিআর অ্যামপ্লিফিকেশন দ্বারা গঠিত ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ বিচ্ছিন্ন হয়ে যায়, যাতে এটি প্রস্তুত করার জন্য প্রাইমারের সাথে মিলিত হতে পারে। প্রতিক্রিয়া পরবর্তী রাউন্ডের জন্য।
প্রাইমার সহ টেমপ্লেট ডিএনএর অ্যানিলিং (পুনর্বিন্যাস):
টেমপ্লেট ডিএনএ গরম করার মাধ্যমে একটি একক স্ট্র্যান্ডে বিকৃত হওয়ার পরে এবং তাপমাত্রা প্রায় 55 ডিগ্রিতে নামিয়ে আনার পরে, প্রাইমারগুলিকে টেমপ্লেট ডিএনএর একক স্ট্র্যান্ডের পরিপূরক ক্রমের সাথে যুক্ত করা হয়।
প্রাইমারের এক্সটেনশন:
Taq-এর কর্মের অধীনে, DNA টেমপ্লেট-প্রাইমার কনজুগেট বেস পেয়ারিং এবং আধা-সংরক্ষিত প্রতিলিপির নীতি অনুসারে টেমপ্লেট ডিএনএ চেইনের পরিপূরক একটি নতুন আধা-সংরক্ষিত প্রতিলিপি চেইন সংশ্লেষণ করতে প্রতিক্রিয়া কাঁচামাল হিসাবে dNTP ব্যবহার করে।
PCR প্রযুক্তির মৌলিক নীতি
প্রযুক্তিটি টেমপ্লেট ডিএনএ, প্রাইমার এবং চারটি ডিঅক্সিরাইবোনিউক্লিওটাইডের উপস্থিতিতে ডিএনএ পলিমারেজের একটি এনজাইমেটিক সংশ্লেষণ প্রতিক্রিয়ার উপর নির্ভর করে।
ডিএনএ পলিমারেজ ডাবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ-র একটি ছোট টুকরো দিয়ে সংশ্লেষণ শুরু করতে একটি টেমপ্লেট হিসাবে একক-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ ব্যবহার করে। এক বা দুটি সিন্থেটিক অলিগোনিউক্লিওটাইড প্রাইমার একক-স্ট্রেন্ডেড ডিএনএ টেমপ্লেটে একটি পরিপূরক ক্রম দিয়ে একত্রিত হয়ে একটি আংশিক ডবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ তৈরি করে।
একটি উপযুক্ত তাপমাত্রা এবং পরিবেশের অধীনে, ডিএনএ পলিমারেজ প্রাইমারের 3´-OH প্রান্তে ডিঅক্সিমোনোনিউক্লিওটাইড যোগ করে এবং একটি নতুন ডিএনএ পরিপূরক স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষ করতে টেমপ্লেটের 5´→3´ দিক বরাবর প্রসারিত করার জন্য এটিকে শুরু বিন্দু হিসেবে ব্যবহার করে।
পিসিআর টিউব এবং সেন্ট্রিফিউজ টিউবের মধ্যে পার্থক্য
পিসিআর টিউব:
PCR প্রতিক্রিয়া প্লেট হল 96-ভাল বা 384-ভাল, যা বিশেষভাবে ব্যাচ প্রতিক্রিয়ার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে। নীতি হল যে পিসিআর মেশিন এবং সিকোয়েন্সারের থ্রুপুট সাধারণত 96 বা 384 হয়।
সেন্ট্রিফিউজ টিউব:
সেন্ট্রিফিউজ টিউব অগত্যা একটি পিসিআর টিউব নয়। তাদের ক্ষমতা অনুযায়ী অনেক ধরনের সেন্ট্রিফিউজ টিউব আছে। সাধারণত ব্যবহৃত হয় 1.5ml, 2ml, 5ml, 15 বা 50ml, এবং সবচেয়ে ছোটটি (250ul) একটি PCR টিউব হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে।
কীভাবে পিসিআর টিউব চয়ন করবেন
আমরা তাপমাত্রার জন্য সবচেয়ে সঠিক অবস্থান বেছে নেওয়ার আশায় পিসিআর টিউবগুলি স্থাপন করা বেছে নিয়েছি।
তাপমাত্রার সবচেয়ে সঠিক অবস্থানটি মডিউলের নীচে তাপমাত্রা সেন্সরের উপরে অবস্থান হওয়া উচিত (সেন্সরের ভুল তাপমাত্রা নির্বিশেষে)।
বিভিন্ন পিসিআর যন্ত্রের তাপমাত্রা সেন্সরের অবস্থান ভিন্ন।
উদাহরণস্বরূপ, AB-এর 2720-এর মাঝখানে একটি মাত্র, MJ-এর 200-এর তিনটি সেন্সর রয়েছে, যেগুলি নীচের বাম, মধ্য এবং উপরের ডানদিকে, Eppendorf-এর A বা H সারিতে থাকা উচিত, এবং ডংশেংলং 811-এ তিনটি তাপমাত্রা সেন্সর রয়েছে, B{{3} } নির্বাচন করা উচিত , C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, কারণ এই বিন্দুগুলি তাপমাত্রার সময়গত বিন্দু।
