সেল সংস্কৃতির পদক্ষেপ এবং সতর্কতা

1. পুনরুদ্ধার

●1। তরল নাইট্রোজেন থেকে cryovial বের করে নিন, অবিলম্বে এটি একটি 37 ডিগ্রী জল স্নান মধ্যে রাখুন, এবং সামান্য ঝাঁকান। তরল গলে যাওয়ার পরে (প্রায় 1-1.5 মিনিট), এটি বের করে নিন এবং কিছু অ্যালকোহল স্প্রে করুন এবং অতি-পরিষ্কার ওয়ার্কবেঞ্চে রাখুন।

●2। উপরের সেল সাসপেনশনটিকে 10ml মাঝারি দিয়ে ভরা একটি 15ml সেন্ট্রিফিউজ টিউবে অ্যাসপিরেট করুন (প্রাচীরের সাথে লেগে থাকা সমস্ত কোষগুলিকে ধুয়ে ফেলার জন্য ক্রায়োপ্রিজারভেশন টিউবটি মাঝারি দিয়ে ধুয়ে নিন), এবং 5 মিনিটের জন্য 1000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউজ করুন।

●3। সুপারনাট্যান্টটি ঢেলে দিন এবং কোষগুলিকে স্থগিত করতে 1 মিলি মিডিয়াম যোগ করুন। একটি 10 ​​সেমি পেট্রি ডিশের মধ্যে 10 মিলি কালচার মিডিয়াম থাকে এবং পেট্রি ডিশের কোষগুলিকে সমানভাবে বিতরণ করার জন্য আলতো করে সামনে পিছনে ঝাঁকান।

●4। কোষের ধরন এবং তারিখ, চাষকারীর নাম ইত্যাদি লেবেল করুন এবং চাষের জন্য CO2 ইনকিউবেটরে রাখুন। কোষগুলি প্রাচীরের সাথে লেগে থাকার পরে, মাধ্যমটি পরিবর্তন করুন।

●5। প্রতি 3 দিন মাধ্যম পরিবর্তন করুন।

2. যাতায়াত

●1। যখন কালচার ডিশে সেল কভারেজ 80 শতাংশ -90 শতাংশে পৌঁছায় তখন প্যাসেজ।

●2। মূল মাধ্যম অ্যাসপিরেট করুন।

●3। উপযুক্ত ট্রিপসিন যোগ করুন (কোষগুলিকে ঢেকে রাখার জন্য যথেষ্ট) এবং 1-2 মিনিটের জন্য হজম করুন।

●4। কোষগুলি গোলাকার হওয়ার পরে, হজম বন্ধ করতে সমান পরিমাণে সিরাম-ধারণকারী মাধ্যম যোগ করুন।

●5। পাইপেটিং দ্বারা কোষগুলিকে স্থগিত করতে একটি পাইপেট ব্যবহার করুন।

●6। কোষগুলিকে একটি 15ml সেন্ট্রিফিউজ টিউবে অ্যাসপিরেট করুন এবং 5 মিনিটের জন্য 1000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউজ করুন।

●7। সুপারনাট্যান্ট ঢেলে দিন, 1-2মিলি মিডিয়াম যোগ করুন এবং কোষগুলিকে উড়িয়ে দিন।

●8। কোষের প্রকারের উপর নির্ভর করে কোষগুলিকে বিভিন্ন খাবারে স্থানান্তর করুন। সাধারণত, 5টি ক্যান্সার কোষ এবং 3টি স্বাভাবিক কোষ থাকে। চাষ চালিয়ে যান।

3. Cryopreservation কোষ এবং সেন্ট্রিফিউজ (ibid.) ডাইজেস্ট। প্রস্তুত হিমায়িত দ্রবণ সহ কোষগুলিকে স্থগিত করুন, এবং তাদের জীবাণুমুক্ত ক্রায়োভিয়ালগুলিতে বিতরণ করুন, তাদের কয়েক মিনিটের জন্য দাঁড়াতে দিন এবং কোষের ধরন এবং ক্রিওপ্রিজারেশন তারিখ নির্দেশ করুন। 30 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রি, 30 মিনিটের জন্য -20 ডিগ্রি, রাতারাতি -80 ডিগ্রি, এবং তারপর সঞ্চয়ের জন্য তরল নাইট্রোজেনে রাখা হয়। ক্রায়োপ্রিজারভেশন সলিউশনের প্রস্তুতি: 70 শতাংশ সম্পূর্ণ মাঝারি প্লাস 20 শতাংশ FBS প্লাস 10 শতাংশ DMSO। DMSO ধীরে ধীরে ড্রপওয়াইজ যোগ করা উচিত, ফোঁটা দেওয়ার সময় কাঁপানো।